外泌體研究常見問題解答122.做外泌體研究，需要多少量的蛋白質(zhì)？不建議過多關(guān)注蛋白質(zhì)濃度，我們的經(jīng)驗(yàn)，蛋白質(zhì)測(cè)量與制劑中外泌體的數(shù)量之間幾乎沒有相關(guān)性。蛋白量不應(yīng)作為制劑中外泌體數(shù)量的估計(jì)。外泌體與蛋白量并不總是一個(gè)很好的相關(guān)性。我們主要使用細(xì)胞培養(yǎng)基和尿液作為起始樣本，即使在這種“簡(jiǎn)單”的溶液中（至少與血漿/血清相比），相關(guān)性也不是很好。這就是為什么我們開始關(guān)注細(xì)胞培養(yǎng)生長(zhǎng)條件，并標(biāo)準(zhǔn)化外泌體收獲條件，以便在正確的時(shí)間收獲并提高系統(tǒng)的可重復(fù)性。血漿和血清中蛋白質(zhì)濃度和外泌體含量之間的相關(guān)性會(huì)更小。許多研究人員使用納米顆粒跟蹤分析（NTA）來測(cè)量囊泡的數(shù)量和大小分布，但這種方法不能提供相同大小范圍內(nèi)任何污染囊泡的信息。因此，電子顯微鏡應(yīng)始終與這種方法相結(jié)合。檢查污染囊泡存在的一種方法可能是進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡以檢測(cè)蛋白質(zhì)，如gp96，一種ER相關(guān)蛋白。3.外泌體WB鑒定時(shí)，選擇哪個(gè)內(nèi)參蛋白？無內(nèi)參蛋白。外泌體包裹的蛋白具有隨機(jī)性，同時(shí)不同細(xì)胞分泌的外泌體具有異質(zhì)性，所以外泌體中沒有哪種蛋白含量是恒定的，也就沒有所謂的內(nèi)參蛋白了。目前的外泌體WB鑒定，只能用于定性檢測(cè)。外泌體研究工具多功能檢測(cè)模塊，一項(xiàng)試劑多指標(biāo)分析，提升性價(jià)比。金線蓮Extracellular Vesicles科學(xué)研究

外泌體定量和表征。研究外泌體的同行們（包括我）一直被外泌體的定量和表征所困擾，什么樣的外泌體才是好的外泌體呢？是評(píng)估其活性？純度？蛋白濃度？還是其他什么指標(biāo)？或者說我們?cè)谧鰧?shí)驗(yàn)時(shí)，怎樣對(duì)外泌體進(jìn)行定量呢？這個(gè)可以說是進(jìn)行外泌體實(shí)驗(yàn)的第一步，必須確定外泌體的量，才好判斷實(shí)驗(yàn)變量是否影響外泌體的發(fā)生或者確定下游應(yīng)用實(shí)驗(yàn)的給藥劑量。你們是如何進(jìn)行定量的呢？目前的外泌體定量方法有以下幾種，分別是：納米顆粒跟蹤分析（NTA）、納米流式、表面標(biāo)志物的ELISA定量試劑盒、BCA或Bradford蛋白定量試劑盒。注：受認(rèn)知所限，有沒有涵蓋的，歡迎補(bǔ)充。上述外泌體定量方法中，以BCA蛋白濃度測(cè)定應(yīng)用的廣，也容易得到（也就是可及性很高）。但是，但是我們分離的外泌體，因獲取樣本的不一致，每種樣本中雜蛋白的含量不盡相同，同時(shí)分離方法也不一定相同，這就導(dǎo)致我們很難確定蛋白量與外泌體量的對(duì)應(yīng)關(guān)系。所以，我們這些外泌體研究者就在兩難之間不斷橫跳。為了解決這些困境，維思克思生物科技提供了整套外泌體鑒定技術(shù)服務(wù)、外泌體分離、示蹤、保存、游離染料清qing除、蛋白定量、脂質(zhì)定量、核酸定量等系列產(chǎn)品。人參Extracellular Vesicles廠家批發(fā)外泌體研究工具自動(dòng)化數(shù)據(jù)分析兼容，適配主流軟件，提升分析效率。

脂質(zhì)定量試劑盒不止于外泌體表征！脂質(zhì)是一大類分子，包括甘油一酯、甘油二酯、甘油三酯、脂肪、甾醇等。脂質(zhì)不僅是生物膜的骨架成分，保護(hù)細(xì)胞膜的完整性，而且還參與細(xì)胞過程，如膜運(yùn)輸、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞凋亡和能量?jī)?chǔ)存。脂質(zhì)代謝的紊亂與許多疾病有關(guān)，例如阿茲海默癥、糖尿病、肥胖癥、、和神經(jīng)退行性疾病以及某些傳染病等。為了研究脂質(zhì)，通常必須首先從組織或細(xì)胞培養(yǎng)物中提取脂質(zhì)，然后進(jìn)行定量。脂質(zhì)定量需要昂貴的設(shè)備，例如HPLC、光散射檢測(cè)技術(shù)或LatroscanTLC-FID分析儀。WSR0028脂質(zhì)定量試劑盒使用硫代磷酸香草醛法測(cè)量樣品的脂質(zhì)含量(不飽和脂肪酸)，從而產(chǎn)生適用于多孔板檢測(cè)的簡(jiǎn)單比色讀數(shù)。首先，將粗制或純化的脂質(zhì)樣品加到96孔板中。然后加入濃硫酸，加熱樣品以溶解總脂質(zhì)樣品，隨后加入脂質(zhì)定量試劑。在酸性條件下，脂質(zhì)與香草醛反應(yīng)形成比色產(chǎn)物，該比色產(chǎn)物易于在酶標(biāo)儀上檢測(cè)。維思克思的脂質(zhì)定量試劑盒ExosomalLipidQuantificationKit(Fluorometric)（WSR0028-2）與WSR0028相結(jié)合，可更好表征外泌體，LNP等！

相信大家一直都被一個(gè)問題困擾，什么樣的外泌體才是好的外泌體呢？采購(gòu)?fù)饷隗w時(shí)，如何判斷外泌體質(zhì)量？現(xiàn)在，我們對(duì)外泌體供應(yīng)商-維思克思的外泌體WSR0014-1進(jìn)行測(cè)評(píng)。咱們來看看高質(zhì)量的外泌體到底長(zhǎng)什么樣？一、首先對(duì)外泌體進(jìn)行鑒定。首先要證明是外泌體，那如何證明呢？一般從三大基礎(chǔ)表征維度進(jìn)行分析：形態(tài)、粒徑分布、外泌體標(biāo)志蛋白。二、確定外泌體顆粒數(shù)與純度。還需另一重要表征維度外泌體的純度。在做實(shí)驗(yàn)時(shí)，怎樣考察純度呢？不同來源的外泌體，因獲取樣本的不一致，每種樣本中雜蛋白的含量不盡相同，同時(shí)分離方法也不一定相同，這可能導(dǎo)致不一致的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。外泌體純度表征可以用顆粒數(shù)/蛋白、顆粒數(shù)/RNA、蛋白/脂質(zhì)、脂質(zhì)/RNA等多個(gè)維度來評(píng)估外泌體純度，避免mian單一方法的局限性。備注：脂質(zhì)濃度用維思克思WSR0028-2測(cè)量；RNA濃度用維思克思WSR0039測(cè)量。三、評(píng)估外泌體的安全性。如果用來做細(xì)胞或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，外泌體中含有影響細(xì)胞或動(dòng)物的成分，實(shí)驗(yàn)的結(jié)果將會(huì)令人非常詛喪。這次測(cè)評(píng)將外泌體的安全性指標(biāo)進(jìn)行的評(píng)估，包括內(nèi)外源病毒、細(xì)菌、支原體的檢測(cè)，結(jié)果顯示安全性指標(biāo)全部合格。外泌體研究工具原料溯源體系完善，保障產(chǎn)品質(zhì)量可追溯，降低風(fēng)險(xiǎn)。

大體積外泌體樣本量處理方案大體積外泌體樣本在濃縮后根據(jù)不同應(yīng)用，銜接不同的外泌體分離純化方法，見下文。01外泌體分離純化對(duì)于外泌體的分離純化，市面上已有許多方法。維思克思總結(jié)出常用、簡(jiǎn)便、效果比較好的三種方法。SEC重力柱基于分子排阻色譜原理，根據(jù)被分離組分分子大小差異進(jìn)行外泌體的分離。具有操作簡(jiǎn)便、高純度和高回收率等優(yōu)點(diǎn)，特別適用于大體積樣本中的外泌體分離。SEC離心柱是離心柱式的外泌體分離產(chǎn)品，離心柱中裝填的介質(zhì)能無差別的吸附雜質(zhì)而不結(jié)合外泌體，實(shí)現(xiàn)超快速、高收率的外泌體分離。磁珠法外泌體分離試劑盒能特異性捕獲外泌體而不吸附雜質(zhì)，實(shí)現(xiàn)高純度、高回收率外泌體分離。具有操作簡(jiǎn)便、高純度和高回收率等優(yōu)點(diǎn)，特別適用于血漿、血清等復(fù)雜樣本中的外泌體分離。02外泌體RNA提取在外泌體RNA提取步驟中，常用的是磁珠法和沉淀法。磁珠法外泌體總RNA提取試劑盒能特異性捕獲外泌體，實(shí)現(xiàn)高純度、高回收率提取，特別適用于血漿、血清等復(fù)雜樣本RNA提取。沉淀法外泌體總RNA提取試劑盒，于外泌體微量RNA的提取，具有提取效率高、提取的RNA種類多、回收的miRNA含量高等特點(diǎn)。外泌體研究工具高兼容性配方，適配多種樣本類型，提升應(yīng)用范圍。金線蓮Extracellular Vesicles科學(xué)研究

外泌體研究工具小批量試用裝供應(yīng)，適合前期方法學(xué)驗(yàn)證，降低試錯(cuò)成本。金線蓮Extracellular Vesicles科學(xué)研究

磁珠法外泌體RNA提取試劑盒。開發(fā)一種在質(zhì)量和得率上合格的外泌體RNA提取方法對(duì)外泌體研究非常重要，許多實(shí)驗(yàn)室已努力開發(fā)這種方法，采用了各種方法，均可供研究人員使用，具有不同程度的實(shí)用性。例如，使用基于大小的過濾器開發(fā)的試劑盒缺乏外泌體部分的特異性；與過濾器尺寸匹配的任何顆粒都將被其保留，包括細(xì)胞碎片、蛋白復(fù)合物，甚至血小板和淋巴細(xì)胞，這取決于過濾器的尺寸。基于聚合物的沉淀和使用離液鹽的直接裂解也缺乏對(duì)囊泡的特異性。我們開發(fā)了一種基于磁珠的外泌體RNA提取方法，該方法可通過簡(jiǎn)單且可重復(fù)的工作流程分離外泌體并從血漿和血清等樣本中提取RNA。與超速離心相比，這種方法可從血漿樣本中捕獲近100%RNA，RNA產(chǎn)量?jī)?yōu)于超速離心法。MicroExosomeTotalRNAExtractionKit（WSR0004）分離出的RNA純度更高、收率相同或更多，對(duì)提取的外泌體RNA特異性高于非外泌體RNA。磁珠法能夠處理更多的樣本量，從而能夠檢測(cè)血清或血漿中的低豐度轉(zhuǎn)錄本。提供了一種更快、更標(biāo)準(zhǔn)化的方法來從血清和血漿等生物流體中的外泌體獲得可靠的高質(zhì)量RNA。金線蓮Extracellular Vesicles科學(xué)研究

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維思克思生物科技（武漢）有限公司（以下簡(jiǎn)稱“公司”）是一家專注建設(shè)工業(yè)級(jí)外泌體生產(chǎn)制造平臺(tái)的高新技術(shù)企業(yè)，以外泌體為主，開發(fā)新一代外泌體創(chuàng)新藥物及再生醫(yī)學(xué)產(chǎn)品。

公司總部位于風(fēng)景秀麗的中國(guó)武漢光谷生物城，并在陜西西安設(shè)有西北大學(xué)聯(lián)合研發(fā)中心。公司已發(fā)表二十余篇高水平研究論文及十余項(xiàng)發(fā)明專利和軟件著作權(quán)，并取得國(guó)家高新技術(shù)企業(yè)、國(guó)家科技型中小企業(yè)、湖北省創(chuàng)新型中小企業(yè)、武漢市“光谷3551人才計(jì)劃”企業(yè)等多項(xiàng)榮譽(yù)資質(zhì)，技術(shù)和研發(fā)實(shí)力雄厚。
公司創(chuàng)始團(tuán)隊(duì)由國(guó)內(nèi)比較早的一批開展外泌體基礎(chǔ)研究的科學(xué)家、經(jīng)驗(yàn)豐富的藥物研發(fā)及工藝開發(fā)技術(shù)人員，以及商業(yè)化人士組建而成。經(jīng)過十余年研究積累，目前已構(gòu)建技術(shù)研發(fā)、生產(chǎn)制造、產(chǎn)品開發(fā)、新藥開發(fā)的完整技術(shù)鏈條，具備穩(wěn)定、多樣的外泌體工程化改造體系及工業(yè)級(jí)外泌體生產(chǎn)體系。同時(shí)，開發(fā)的外泌體高產(chǎn)無血清培養(yǎng)基及高效分離介質(zhì)，能提升外泌體產(chǎn)量及純化效率，降低生產(chǎn)成本，推動(dòng)外泌體在醫(yī)藥、醫(yī)療、醫(yī)美等領(lǐng)域的產(chǎn)業(yè)應(yīng)用。